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第228章 35%(感谢牛津面的盟主!)(1 / 5)

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  项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。

  虽然之前江河用加入dmso的方法,解决了pcr扩增阶段引物二聚体的问题。

  但解决了一个问题,接下来还会出现更多的问题……

  现在的瓶颈,卡在了提取上。

  mirna在血液中的含量极低,且非常容易被血液中的rna酶降解。

  纯度不够。

  a260/280的比值正常应该在到之间,低于就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。

  而a260/230比值只有,更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。

  用这种样本去做下一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,后面的pcr扩增根本跑不出真实数据。

  蔡卓群试图寻找原因:“王教授,是不是氯仿的用量不够?我们在取上清液的时候,可能还是带入了一些中间层的蛋白质。”

  王晓晴摇摇头:“上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十,离心时间也延长了五分钟,纯度是稍微好了一点,但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。”

  陆晓林在一旁分析:“血清里全是蛋白,游离的核酸少,trizol提取法,用在血清上,天生就有缺陷。”

  实验室众人,陷入沉默。

  其实在后世,有专门针对血清的柱提法商业试剂盒,傻瓜式操作,半个小时就能得到高纯度的mirna。

  但在08年,专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到,就算买到了技术也还远未成熟,所以只能用最基础的化学试剂,手工一步步去抠。 ↑↑