第192章 实验正式开始(1 / 5)
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此话一出,几个人的神色瞬间变得严肃。
跟江河混了这么久,他们很清楚这个项目的分量。
江河从包里拿出一沓打印好的a4纸,分发给众人。
“这是我这两天做出来的实验方案,大家先看一看。”
众人接过方案,低头翻阅。
江河:“这个项目的前景有多大,我以前跟你们说过,但我今天必须给你们打个预防针,这个过程,会极其枯燥,且充满挫折。”
“简单来说,我们要在血液里,找到与肿瘤相关的mirna,目前,针对血清mirna的商业化提取试剂盒还不够成熟,我们只能用最基础的方法来做。”
江河站起身,走到白板前,拿起马克笔画了一个简单的流程图。
“第一步,rna提取,这是最耗时的一步,也是你们未来几个月每天都要重复的工作。”
“我们手头有近六百份血清样本,我要求你们使用trizol ls试剂法来进行提取,因为血清中本身存在大量的rnase(核糖核酸酶),如果不迅速裂解,我们的目标rna就会降解得一干二净。”
“记住几个核心要点。”
“第一,绝对的无酶环境,我们的枪头、ep管必须是去rna酶处理过的,台面每天实验前用rnasezap喷洒后,再用depc水擦拭。”
“第二,加氯仿后的相分离,离心完,吸取上层水相的时候,手千万不要抖,哪怕少吸一点水相,也绝不能吸到中间的白色蛋白层,一旦污染,后面的数据全废。”
唐培认真地在方案上做着笔记:“老大,提取完之后呢?”
“提取完之后,是逆转录(rt)和实时荧光定量pcr(qpcr)。” ↑↑